1.阳离子交换树脂的再生 (1)称取1Mberlite-CG-50阳离子交换树脂20g,用0.5mol/LNaOH浸泡30min,水洗至中性,再用0.5mol/LHCI浸泡30min,水洗至中性 2.装柱前检查 (1)清洗层析柱,检测层析柱是否洁净,用水进行冲洗 (2)接头密闭检测层析柱接头的密闭性,防止侧面漏水,保证管路畅通 (3)层析柱安装:层析柱垂直安装,不倾斜 3.装柱 (1)将树脂用水搅拌均匀,装入层析柱,防止层析柱流干 (2)用300mL含0.05mol/LNaCl的0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0±0.2)洗涤杂蛋白 4.平衡 (1)用200mL含0.05mol/LNaCl的0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0±0.2)进行层析柱系统平衡 5.仪器校正 (1)在平衡过程中,对在线紫外检测仪进行校正。校正结束后,打开电脑中“核酸蛋白”检测软件 6.上样 (1)将鸡蛋清样品上样,流速:3mL/min 7.洗涤 (1)上样结束后,用含0.05mol/LNaCl的0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0±0.2)进行洗涤,将系统中残留的样品全部清洗干净 8.洗脱 (1)用含0.5mol/LNaCl的0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0±0.2)以3mL/min流速进行洗脱,收集洗脱峰 9.注意事项 (1)提取过程中注意温度变化对提取量的影响 (2)提取过程中,调节pH值 (3)搅拌过程中避免剪切力过大,防止酶变性失活
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